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〈Original〉Generation and some characterization of BAC transgenic mouse that neurally expresses antisense RNA against the potential longevity determinant miR-29
https://kindai.repo.nii.ac.jp/records/5328
https://kindai.repo.nii.ac.jp/records/5328a3032d7f-e1b4-45d1-96e7-17e46c379442
| 名前 / ファイル | ライセンス | アクション |
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AN00064044-20130330-0001.pdf (2.1 MB)
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| Item type | ☆紀要論文 / Departmental Bulletin Paper(1) | |||||||||||||
|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|
| 公開日 | 2013-07-13 | |||||||||||||
| タイトル | ||||||||||||||
| タイトル | 〈Original〉Generation and some characterization of BAC transgenic mouse that neurally expresses antisense RNA against the potential longevity determinant miR-29 | |||||||||||||
| その他（別言語等）のタイトル | ||||||||||||||
| その他のタイトル | 〈原著〉脳特異的miR-29ノックダウンマウス | |||||||||||||
| 著者 |
TANABE, Hiroyuki
× TANABE, Hiroyuki
× MATSUURA, Yoshinori
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| 言語 | ||||||||||||||
| 言語 | eng | |||||||||||||
| キーワード | ||||||||||||||
| 主題 | mi R-29, microRNA, lifespan, aging, brain | |||||||||||||
| 資源タイプ | ||||||||||||||
| 資源タイプ識別子 | http://purl.org/coar/resource_type/c_6501 | |||||||||||||
| 資源タイプ | departmental bulletin paper | |||||||||||||
| 著者(英) | ||||||||||||||
| 言語 | en | |||||||||||||
| 値 | 田辺, 寛之 | |||||||||||||
| 著者(英) | ||||||||||||||
| 言語 | en | |||||||||||||
| 値 | 松浦, 喜徳 | |||||||||||||
| 著者 所属 | ||||||||||||||
| 値 | Department of Bioscience, Fuculty of Agriculture, Kinki University | |||||||||||||
| 著者 所属 | ||||||||||||||
| 値 | Department of Bioscience, Fuculty of Agriculture, Kinki University | |||||||||||||
| 著者所属(翻訳) | ||||||||||||||
| 値 | 近畿大学農学部バイオサイエンス学科 | |||||||||||||
| 著者所属(翻訳) | ||||||||||||||
| 値 | 近畿大学農学部バイオサイエンス学科 | |||||||||||||
| 版 | ||||||||||||||
| 出版タイプ | VoR | |||||||||||||
| 出版タイプResource | http://purl.org/coar/version/c_970fb48d4fbd8a85 | |||||||||||||
| 出版者 名前 | ||||||||||||||
| 出版者 | 近畿大学農学部 | |||||||||||||
| 書誌情報 |
近畿大学農学部紀要 en : Memoirs of the Faculty of Agriculture of Kinki University 巻 46, p. 1-14, 発行日 2013-03-01 |
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| ISSN | ||||||||||||||
| 収録物識別子タイプ | ISSN | |||||||||||||
| 収録物識別子 | 04538889 | |||||||||||||
| 抄録 | ||||||||||||||
| 内容記述タイプ | Abstract | |||||||||||||
| 内容記述 | [Synopsis] miR-29, a gene family of microRNA, is highly expressed across the entire adulthood until life termination in the mouse central nervous system. Its expression is almost unique to astroglia throughout the adult brain. Given a leading part that microRNAs play in a broad spectrum of biological events, it is convincing to hypothesize that miR-29 present in the central nervous system is causally involved in the setting of the maximum duration of mammalian life. To address this notion, establishment of an experimental regime is needed that allows for induction of stable loss-of-function phenotypes for miR-29 specifically in the adult mouse brain. BAC (bacterial artificial chromosome)-mediated transgenesis is a powerful technology that facilitates spatial and temporal modulation of gene expression in vivo. Here we set out a BAC transgenic mouse that displays brain-specific conditional knockdown of miR-29 by overexpressing antagonistic transcripts against this microRNA. We first selected Ntrk2, a neurotrophin receptor gene, as the BAC driver gene providing the promoter and enhancer activities necessary for brain-specific expression of the transgene. The mouse Ntrk2 gene is essentially specific to the brain and predominantly expressed in astroglia. We identified two mouse BAC clones harboring a distinct Ntrk2 genomic segment by web searches, and unified them via their overlapping sequence to represent a genomic region large enough to cover appropriate regulatory elements for optimal transgene expression. We next modified the fusion BAC clone as the vector for delivery and expression of the transgene in the brain by recombining a DNA cassette encoding antisense RNAs against the miR-29 just downstream of the Ntrk2 translation start codon in order for transcription of the miR-29 antagonist to be driven by the Ntrk2 promoter. Finally, the resulting BAC targeting construct was injected into fertilized oocytes, and six independent transgenic founder lines that transferred the transgene to their offsprings were obtained. Out of these, five founder lines showed successful expression of the anti-miR-29 transcripts. Analysis of one representative founder line revealed a substantial decrease in the endogenous miR-29 level only in the brain compared with non-transgenic littermates. [要約] miR-29は哺乳類生物種固有の寿命決定プログラミングの中心的存在として働いている可能性を有するマイクロRNAの1種であるが, 遺伝子のin vivo機能の解明において安定な機能損失型表現形質の構築は不可欠である。今回, 生物寿命の決定機構と脳組織でのmiR-29の機能的役割との関係解明の手段として, miR-29の機能阻害性アンチセンス鎖を脳内で特異的に発現するBAC tg マウスを作製した。まず, 脳特異的に発現し, かつmiR-29が主に存在するアストロサイト内での発現性が特に高い遺伝子として神経栄養因子受容体の1種TrkBの遺伝子Ntrk2を特定した。つぎに, Ntrk2の遺伝子座が挿入されている2種のBACクローンをWeb検索により選択し, これらのNtrk2遺伝子領域間の組換えにより100kb以上の上流発現調節領域を包含した融合BACを作製した。一方で, miR-29の機能阻害活性を有するアンチセンス配列をデザインした後, この配列を含む遺伝子カセットを相同組換えにより融合BAC内のNtrk2プロモーター下流に組込んだBAC型トランスジーンを構築した。このトランスジーンをC57BL/6系マウスの受精卵に注入して得られた産仔の中から, 染色体にトランスジーンが導入されたファウンダー個体をサザン解析によりスクリーニングした。さらにこのファウンダーと野生型マウスを交配してF1個体を得た。このF1個体の脳, 心臓, 肺の各組織中の成熟体miR-29をRT-PCRで定量したところ, 脳のみでmiR-29RNAコピーの増幅抑制が認められた。 | |||||||||||||
| フォーマット | ||||||||||||||
| 内容記述タイプ | Other | |||||||||||||
| 内容記述 | application/pdf | |||||||||||||
