@techreport{oai:kindai.repo.nii.ac.jp:00014059, author = {永井, 宏平}, month = {Jan}, note = {研究成果の概要(和文): 全身性エリトマトーデス(SLE)や混合性結合組織病(MCTD)などの自己免疫疾患の患者の末梢血単核球で増加する脱リン酸化U1-68kの簡便な検出法の確立を試みた. (1)免疫学的方法, (2) phos-tag電気泳動法, (3)等電点ウエスタンブロット法の3種類を検討した結果, (3)の等電点ウエスタンブロット法が適していることが判明した. また, 核分画の代わりにSDSを含む抽出液で調整した全細胞抽出液が使用できることが判明した. 全細胞抽出液と等電点ウエスタンブロット法を組み合わせることで, 検出に必要な時間を5日から2.5日に削減することができ, 臨床の現場で使用できる簡便な検出法の開発に成功した. 研究成果の概要(英文): In this study, we tried to establish an useful method for detecting a de-phosphorilated form of U1-68k autoimmunogen, which was found to be increased in peripheral blood mononuclear cells of patients of systemic lupus erythematosus or Mixed connective tissue diseases. As a substitution of a conventional 2D-western blot method, we examined three methods; (1) an immunological method, (2) a phos-tagelectrophorsis, and (3)an isoelectric focusing electrophoresis-western blot. As a result, we found that the isoelectric focusing electrophoresis-western blot method is most suitable for the detection of the de-phosphorilated form of U1-68k. Moreover, we found that whole cell extract prepared by cell lysis buffer containing SDS can be used for detecting U1-68k. In conclusion, combination of isoelectric focusing electrophoresis-western blot and whole cell extract by SDS-containing cell lysis buffer can shorten analsys time from 5 days to 2.5 days., 研究種目:若手研究(B); 研究期間:2012~2013; 課題番号:24790564; 研究分野:医歯薬学; 科研費の分科・細目:境界医学・病態検査学, application/pdf}, title = {自己抗原蛋白質U1-68kの脱リン酸化を指標とした膠原病の早期診断マーカーの開発}, year = {2013}, yomi = {ナガイ, コウヘイ} }